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    白介素檢測(cè)試劑盒試驗(yàn)操作要點(diǎn)

    發(fā)布時(shí)間: 2022-06-01  點(diǎn)擊次數(shù): 1755次

    白介素檢測(cè)試劑盒采用的是生物素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定樣品中人白介素的水平。向預(yù)先包被了人白介素單克隆抗體的酶標(biāo)孔中加入白介素,溫育;溫育后,加入生物素標(biāo)記的抗白介素抗體,再與鏈霉親和素-HRP結(jié)合,形成免疫復(fù)合物,再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶,然后加入底物A、B,產(chǎn)生藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的。顏色的深淺與樣品中人白介素的濃度呈正相關(guān)。試劑盒的合理操作尤為重要,以下是白介素檢測(cè)試劑盒試驗(yàn)操作要點(diǎn),為了確保實(shí)驗(yàn)的成功大家有必要了解一下!


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    1、為避免交叉污染,要避免重復(fù)使用手中的吸頭和封板膜。


    2、不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。


    3、配制試劑時(shí),要用旋渦混合儀混勻。加入孔內(nèi)的試劑,充分混勻?qū)y(cè)試結(jié)果尤為重要,使用微量振蕩器(使用zui低頻率),如無(wú)微量振蕩器,可在反應(yīng)前手工輕輕晃動(dòng)酶標(biāo)板1分鐘,例如做圓周動(dòng)作,使加入孔中的反應(yīng)液混勻。


    4、各步驟加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校準(zhǔn)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間一般控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。


    5、實(shí)驗(yàn)用酶標(biāo)儀應(yīng)嚴(yán)格按使用說(shuō)明書(shū)規(guī)范操作,并在使用前充分預(yù)熱。


    6、手工洗板應(yīng)注意:甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體;在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙,酶標(biāo)板朝下用力拍幾次;將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內(nèi),浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要,重復(fù)此過(guò)程數(shù)次。自動(dòng)洗板:如果有自動(dòng)洗板機(jī),應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過(guò)程中。


    7、底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。


    8、每次試驗(yàn)測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔zui高濃度的OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)乘以總稀釋倍數(shù)(×n)。


    9、嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。


    10、所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按生物廢棄物處理。終止液為2M硫酸,使用時(shí)必須注意安全。


    11、從2-8℃取出的白介素檢測(cè)試劑盒,在開(kāi)啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。


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